Este documento describe un método de reacción en cadena de la polimerasa en tiempo real (PCR en tiempo real) para la detección cualitativa de ADN específico del caballo derivado de alimentos y piensos. Requiere la extracción de una cantidad adecuada de ADN amplificable por PCR de la matriz correspondiente y se puede aplicar a la detección de material de caballo derivado de caballo doméstico (Equus caballus), mula (Equus caballus ♀ × Equus asinus ♂), hinny (Equus caballus ♂ × Equus asinus ♀) y zebroide (Equus caballus × Equus simplicidens). El ensayo también detecta las especies caballo de Przewalski (Equus przewalskii) y cebra (Equus burchellii). La secuencia blanco es un fragmento del cromosoma 28 del ensamblaje de genoma completo EquCab3.0 de un Equus caballus aislamiento Twilight raza Purasangre (número de accesión GenBank NC_009171.3)[1], que está presente en una sola copia por genoma haploide. El ensayo de PCR proporcionado para esta secuencia tiene un límite absoluto de detección de cinco copias por reacción, con ≥ 95 % de replicabilidad a esta concentración (LOD95%).